取培养皿中培养的青枯病菌,注意菌落颜色、大小、质地与植物病原真菌菌落有哪些不同?然后进行细菌染色观察
(1)涂片 取洁净的载玻片,加一滴无菌水,从发病部位或培养菌落上挑取适量细菌放于载玻片上水滴中,均匀涂布成薄层后,自然晾干。
(2)固定 将涂片在酒精灯火焰上缓慢通过2~3次进行固定。
(3)染色 滴苯酚品红染液或结晶紫草酸铵染液于涂片上,染色1min。
(4)水洗 斜置载玻片,用洗瓶自其上方轻轻冲去多余染液,注意不可洗去涂抹的菌液部分。
(5)吸干 用滤纸吸去水份,晾干或用微火烘干。
(6)镜检 将制片依次用低倍镜、高倍镜找到观察部位,再用油浸物镜观察细菌形态。观察前先在细菌涂面上滴少许香柏油,再慢慢将镜头下放,使油镜头浸入油滴中,并由一侧注视,使镜头与玻片接触。观察时用微动螺旋慢慢将油镜向上提至观察物象清晰为止。操作不熟练时,不可轻易在观察时将镜头直接下放,以免压碎玻片,损坏镜头。
镜检完毕后,用镜头纸沾二甲苯轻擦镜头,除净附油。注意勿使二甲苯渗人镜头内部,防止损坏镜头。